孢子不易被染色许提升染色通透-显微镜高倍油镜观察
内孢子染色(Endospore staining)
一、目的：利用鉴别染色技术，将产生内孢子之细菌细胞及内孢子或游离孢子予以染色区别。
细菌细胞(繁殖体)→内孢子(endospore 绿色)→游离孢子(free spore)
二、原理：孢子不易被染色，透过加热(80℃)，提升染色通透性，无菌体细胞可被水脱色，
再利用番红覆染，使细菌细胞呈红色，内孢子呈绿色。
三、材料：
1.显微镜 2.拭镜纸 3.酒精灯 4.接种环 5.染色盘 6.载玻片 7.蒸馏水
8.95%酒精 9.洋杉油 10.二甲苯 11.水浴槽 12.玻片夹 13.镊子
14.内孢子染料：○1孔雀绿(初染剂) ○2番红染剂
15.菌种： ○1Escherichia coli (E.coli)大肠杆菌 ○2Bacillus subtilis 枯草杆菌
二、方法：
1. slide 洗净烘干备用 2. 取1 loop 菌液于slide 涂开
3. 烘干固定 4. 加初染剂孔雀绿覆盖菌膜
5. 80℃水浴加热5~6min(初染剂不可干掉)
6. 放冷，背面水洗 7. 加番红染剂30sec
8. 背面水洗 9. 拭干，显微镜高倍油镜观察 10. 画图并纪录之
