微生物相衬显微镜增加对比度是相差技术
对比度
如果不能将微生物从悬浮的基质中分离出来，会降低显微镜的
放大率和分辨率。利用染料或调节光学系统，可增强对比度，便于
显微观察。
微生物被染料染色后，光线经过时被吸收的程度高于背景，从
而产生色差，加深了对比度。观察细胞内部结构或者细胞壁时，染
色是一个非常有用的手段，如革兰染色。然而，染色经常使细胞结
构发生变化，这个问题值得注意。虽然亚甲基蓝类染色剂不改变细
胞形态，但化学药品对微生物终究是有毒性的。还有一个选择就是
负染色法，利用苯胺黑使背景颜色加深，突出微生物的浅色而增加
对比度，而且不影响细胞活性。通过染色法，能够得到微生物的相
关信息，如细胞的形状和荚膜的位置等。相差显微镜不能观察颜色
，所以可以用明视野显微镜来观察染色后的样品。
另一个增加对比度的方法是利用相差技术，它把透过标本的可
见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各
种结构变得清晰可见。光线衍射的程度是由介质的折射率决定的。
相差显微镜就是来增强微生物和周围环境之间的折射率而提高它们
的对比度，使微生物形态更易于观察。与明视野显微镜相比，相差
显微镜的优势在于可不用染色而清楚地观察活细胞。因为相差显微
镜观察的样品不用染色，所以不适用于染色的样品。
