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酶的制备实验-层析是纯化酶时常要经过的步骤




来源:yiyi
时间:2016-8-30 20:55:37

酶的制备实验-层析是纯化酶时常要经过的步骤


     制酶的实际操作方法与设备仪器一发生故障,即无法再继续
操作。切记手续能简则简,别无他法时,再改用比较复杂的方法。
  
     基本设备、特殊材料与试剂  测定酶活性少不了一台紫外可
见分光光度计,最好再联上一台记录仪,用以记录某段时间内酶反
应的过程。如果由于反应量过少或其他原因,用分光光度计无法测
量或测不准的时候,就要利用放射性同位素的高度灵敏性,在酶反
应的过程中混入某种放射性同位素,再用闪烁计数器
    测出反应的结果。
    酶的制备常免不了要离心分离。固然在工业上分离沉淀总是用
过滤的方法,但是在实验室里则以离心分离比较简便好用。离心分
离机以能使转室温度保持在0℃以下,转速能达每分钟二万转者最常
用到,大小各式转头最好具备。
    柱层析是纯化酶时常要经过的步骤。虽然在实验室中用普通玻
璃管、滴定管、甚至注射器就可以制成层析柱,而分离出来的液体
也可以人工分部收集(Fraction—collecting),再用分光光度计逐
个试管去测定活性。但是如果能有一套设备,其中包括几支大小长
短不同的层析柱,一台自动分部收集器(Fractioncollector),并
配有一部紫外监测仪(uvmonitor),一台蠕动泵(Peristalticpump)
,和一具梯度混合器(Gradientmixer),则使用起来极为方便省时
。这样的一套设备所值和分光光度计相仿,现以瑞典Pharmacia—L
KB公司的出品最为人所乐用。
    因为由生物体中提取酶要先将细胞破坏,所.以搅碎器(Blend
er)和匀浆器(Homogenizer)都是酶实验室常要用到的工具。其他如
精密天平、复电极pH计、搅拌器、制冰机等也都是一般生物化学实
验室所必需有的设备

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