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分离纯化菌种过程中需要转接菌落到液体培养基




来源:yiyi
时间:2017-1-19 0:44:21

分离纯化菌种过程中需要转接菌落到液体培养基

     菌落的转接和纯化
    在分离纯化菌种过程中需要转接菌落到液体培养基中。
    1.在菌落转接前,首先用气相色谱仪分析培养管中是否有甲
烷存在。若有甲烷,表明培养管中存在产甲烷菌菌落。鉴于在所有
厌氧菌中只有产甲烷细菌菌落能同时产生甲烷和荧光,所以可以在
双筒解剖镜下观察不同形状的菌落,在荧光显微镜下挑选产生荧光
的菌落。
    2.按厌氧操作法常规要求,在装有5mL液体培养基的培养管中
,加入硫化钠(1%)与碳酸氢钠(5%)的混合液、青霉素液和所分离
产甲烷菌生长的相应基质各0.1mL。
    3.把欲挑取菌落的厌氧培养管放置于解剖显微镜镜台上,调节双筒
解剖镜,找到欲挑取的菌落。用胶布固定培养管,不让它移动。
    4.将两个氮气流的针头在酒精灯火焰上灭菌,分别打开装有
液体培养基的培养管胶塞,在将要拔出时,小心插入氮气流针头,
绝对避免空气进入厌氧培养管。氮气流针头插进长有菌落的厌氧培
养管后,用胶布固定以防止针头脱出和空气乘机窜人。氮气流量应
比其它操作时适当大一些。
5.将约8℃m长的胶管挂于自己颈部,右端接一根内装有少许棉花
的灭菌毛细管,胶管左端衔于口中。右手拿住毛细管,插入打开胶
塞而有氮气流的厌氧培养管中,用口吸去胶管和毛细管中的空气,
从而使胶管和毛细管中充满氮气。
    6.在胶管和毛细管中充满氮气后,右手大拇指和食指夹紧胶
管,同时用门牙咬紧在口中的胶管端,迅速取出并插入欲挑取菌落
的培养管中,毛细管细12:I轻轻接触欲挑取的菌落,此时口轻轻
吸气,使菌落吸进毛细管口。然后谨慎移出毛细管,迅速插入含有
培养基的培养管,轻轻呼气,使毛细管口处的菌落物进入培养基。
呼气不能过大,以避免使口中空气吹入液体培养基,破坏培养基厌
氧环境。取出毛细管,塞好胶塞。
    7.当以氢和二氧化碳作基质时,则用无氧的氢气代替氮气,
再加入3mL无氧的二氧化碳,或者直接使用氢气和二氧化碳的混合
气体。转种后样品置34~40℃下培养,培养好时,摇动培养物应出
现云雾状或乳白色胶团。与未接入菌落的液体培养基相比,判断是
否有产甲烷菌生长和生长的优劣。

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