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使用膜滤器过滤细胞培养的溶液中沉淀物-细胞实验




来源:yiyi
时间:2017-3-16 17:22:55

使用膜滤器过滤细胞培养的溶液中沉淀物-细胞实验


溶液的过滤除菌
  许多用于细胞培养的溶液中含有一种或多种对热不稳定的成分(如
抗生素),或几种成分构成的体系(如磷酸盐缓冲体系),如果将它们进
行高压蒸汽消毒,则会生成有毒的沉淀物。因此,使用膜滤器对这些溶
液进行冷消毒是最普遍的方法。

  0.2μm微孔滤膜适于一般情况灭菌;然而,一些环境应激细菌(如
假单胞菌属SP.)及支原体就能够通过这类滤膜。为了能最大限度地去
除这些组织培养中常见的微生物污染,就要采用孔径为o.1灶m微孔滤
膜过滤培养液和血清。滤膜制造商可提供不同类型的滤膜。就细胞培养
而言,醋酸纤维素或硝酸纤维素滤膜通常用于过滤诸如培养液和缓冲液
等液体。值得注意的是,在使用前应该用热的去离子水冲洗薄膜,清除
其中可能引起细胞毒性的可溶性物质。尼龙膜含较少的表面活化剂或润
湿剂等可溶性物质;聚乙烯磺酸膜中含少量的可溶性物质并很少与蛋白
质结合。

  预先除菌的、随时可用的一次性过滤系统省时省力,消除了早期过
滤方法存在的隐患。过滤器范围广,从小(≤lOml)到大(≥20L),体积
不等。这种一次性的系统也适用于真空或正压过滤。许多生产商根据细
胞培养的使用要求,设计出特殊的过滤系统:灭菌膜、滤套和接收瓶,
并确保它们无细胞毒、无致热原。对于制备培养基,使用无细胞毒的醋
酸/硝酸纤维素滤膜,或其他相似的滤膜,以及食品级硅管。

  注意:所有程序均遵循无茵技术。

     适于哺乳动物细胞的培养基

  进行体外哺乳动物的细胞培养,其要点之一是在培养器皿中营造一
种生理环境和特殊细胞类型的特异性反应。液态培养基至少要为细胞提
供生长所需的营养物质、能量、恒定的pH和适当的渗透压。此外,培养
的外环境,尤其隔水式COz培养箱,一定要达到稳定的温度和湿度,以
防培养液蒸发,还要供给呼吸所需的02和维持培养液中碳酸氢盐缓冲系
统的C02。目前普遍使用的培养基一般由两部分组成:基础营养和补充
成分。它们的组成可有相当大的差别。无论怎样,完全培养基的这两组
成分都是细胞存活和增殖所不可缺少的。

  注意:用于细胞培养的所有溶液和培养液,均应使用反向渗透系统
生产的纯净水配制;用后的培养器皿要用水冲洗,不要用消毒剂处理。

  注意:所有与活细胞接触的试剂与器械一定要灭茵,同时采用相应
的无菌技术。

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