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电镜物理固定一般采用低温冷冻使之由液态变固态




来源:yiyi
时间:2017-4-12 14:35:30

电子显微镜物理固定一般采用低温冷冻使之由液态变固态

   取样与固定

  第一个遇到的问题是取样。首先要注意研究对象的空间和时间位置
。比如,想研究花粉发育,就要分期采取从幼小到成熟的花药;想研究
受精,就要估计受精过程的大致时间范围,在此期间分批采取子房与胚
珠样品。有些植物的受精过程较长,有数天至数月之久,取样可以按小
时或天数计;有些植物的受精过程短促到数小时内即已完成,那就必须
按分钟计,分批取样,才能捕捉受精的各个瞬间。

  采集的样品是新鲜的生活材料,如欲观察其中的生活状态,必须设
法直接观察,但更经常的做法是对样品施行化学的或物理学的处理,使
之尽可能保持当时的细胞状态,这叫“固定”  (fixation)。固定的作
用可以用煮鸡蛋或腌制皮蛋来比喻:鲜蛋是溶胶状态的,不能用刀切;
煮熟或腌制后变成凝胶状态,便可以切片了。化学固定使用各种固定剂
,如光镜观察中常用的酒精、醋酸、福尔马林以及上述药品的种种混合
配方,电镜观察中的戊二醛、锇酸等。不过,经过化学固定,细胞已被
杀死,结构会发生改变,不可能完全保存生活时的原貌,所以观察结果
只能获得近似值。物理固定一般采用低温冷冻,使材料由液态变为固态
,犹如豆腐变成冻豆腐那样,也可以保存和切片。这种固定方法的最大
优点是能保存那些化学固定剂保存得不够理想的活性蛋白质(如酶),因
此在免疫细胞化学研究上大派用场,甚至是不可或缺的手段。这是因为
,免疫细胞化学的研究目标是细胞内特定的抗原(主要是蛋白质分子),
要通过抗原一抗体反应来对它们进行定位,而抗原很容易在化学固定中
遭到不同程度的破坏和流失,从而导致假象。而快速冰冻则可大大减少
这方面的损失。

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