植物微生物学多光子显微技术样品检测显微镜
多光子激发荧光显微技术
在多光子激发荧光显微技术中,荧光发色团是被两个或更多的比发
射光波长更长的光子所激发的。因为激发只发生在显微镜的焦点上,所
以不对准焦点的就吸收的很少,因此有更多的激发光到达聚焦平面。在
原理上,多光子激发荧光显微技术法有三个主要优点:具有很强的穿透
厚样品的能力;采用红外光激发而实现对活细胞光损伤最小化,以及减
少聚焦平面外的光漂白。
多光子显微技术在改善深嵌于植物组织中的微生物细胞的成像方面
具有很大的应用潜力。因为其他类型显微镜照明用的紫外光会引起植
物细胞受到一定程度的光损伤,所以多光子显微技术对于植物表面上具
有紫外吸收能力的荧光发色团标记的细菌细胞的显微成像非常有用。
这为微生态研究人员提供更多的可用荧光发色团,来研究在植物环境中
细菌的行为。但是有证据表明,实际上聚焦体积内的光漂白效应比单光
子激发更严重,特别是对于薄的样品)。甚至对于绿色荧光蛋白(GFP)这
种被认为是相对稳定的荧光分子也是如此。但是,更进一步限制该技术
在植物微生物学中应用的事实也许是,多光子显微技术本身的分辨率始
终比单光子显微镜技术(如CLSM)低。尽管如此,多光子显微技术大大改
善了植物组织的三维成像效果,但实际上该技术仅适用于尺寸较大的微
生物的成像,而不适用于细菌。据我们所知,目前多光子显微技术主要
应用于微生物学生物膜的研究上66。随着价格低廉的多光子显微
