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普通显微镜下EGFP原核表达,扩增质粒致细菌变绿原因




来源:责任编辑:yiyi
时间:2011-6-21 9:26:22

本来这普通显微镜是无法看到荧光的所以导致,显示结果原因有:

1)并不是说发光波长在可见光范围就是可见的。荧光是需要光激发产生的(或是可见光,或是紫外,红外光)。
由於螢光和激勵光相比,是非常微弱的,因此螢光顯微鏡的光源強度必須很高,即使在近紫外區,
也必須有足夠的強度,為了滿足上述要求,通常採用高壓汞燈,但有時為了特殊需要,也採用氙燈或鹵素燈。(

所以普通的显微镜光源不够强
,这是其一,第二就是关于光学视野, 通常螢光的強度和激勵光相比,
是極微弱的(10-3 ~ 10-5 )如果螢光和激勵光相疊加,反差就會極度地減弱,因此,必須把激勵光和螢光徹底地分離出來。再此外,荧光易衰减,
荧光显微镜有相应的设置减少其衰减。


2)是酵母污染所致!酵母孢子很顽固,需要整个环境通风处理。在普通的生物学实验室,细菌、酵母等常在一起操作,甚至用不着操作酵母,环境中的野生酵母孢子就可以产生这种结果,很典型。
如果产生噬菌体污染,将出现培养液先浑浊(细菌长起来了),然后很快变成清亮的现象。如果是在划板培养,会有噬菌斑现象。

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荧光显微镜使用的重要注意事项

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